Η τεχνική Kirby-Bauer είναι μια τυπική μικροβιολογική μέθοδος που χρησιμοποιείται για τον προσδιορισμό της ευαισθησίας των βακτηρίων σε αντιμικροβιακούς παράγοντες. Περιλαμβάνει τη μέτρηση της ζώνης αναστολής της βακτηριακής ανάπτυξης γύρω από δίσκους εμποτισμένους με αντιβιοτικά που τοποθετούνται σε πλάκα άγαρ εμβολιασμένη με τον εξεταζόμενο οργανισμό. Εδώ είναι τα γενικά βήματα της τεχνικής Kirby-Bauer:
1. Παρασκευή Εμβολίου :
- Λαμβάνεται καθαρή καλλιέργεια του δοκιμαστικού βακτηριακού στελέχους και αναπτύσσεται σε κατάλληλο μέσο καλλιέργειας ζωμού για να επιτευχθεί λογαριθμική φάση ανάπτυξης (θολότητα).
- Το βακτηριακό εναιώρημα είναι τυποποιημένο σε μια συγκεκριμένη θολότητα, τυπικά ισοδύναμη με ένα πρότυπο θολότητας 0,5 McFarland, για να διασφαλιστεί μια σταθερή πυκνότητα εμβολίου.
2. Εμβολιασμός πλάκας άγαρ :
- Για τη δοκιμή χρησιμοποιούνται αποστειρωμένες πλάκες άγαρ που περιέχουν άγαρ Mueller-Hinton ή άλλο κατάλληλο μέσο άγαρ.
- Χρησιμοποιώντας ένα αποστειρωμένο βαμβάκι, το τυποποιημένο εμβόλιο απλώνεται ομοιόμορφα στην επιφάνεια της πλάκας άγαρ για να δημιουργήσει ένα συρρέον γρασίδι ανάπτυξης βακτηρίων.
- Η ενοφθαλμισμένη πλάκα αφήνεται να στεγνώσει για λίγα λεπτά για να απορροφήσει την υπερβολική υγρασία.
3. Εφαρμογή Αντιβιοτικών Δίσκων :
- Αποστειρωμένοι δίσκοι αντιβιοτικών που περιέχουν συγκεκριμένες συγκεντρώσεις αντιμικροβιακών παραγόντων τοποθετούνται στην επιφάνεια της πλάκας άγαρ σε ομοιόμορφα διαστήματα χρησιμοποιώντας αποστειρωμένη λαβίδα ή διανομέα δίσκου.
- Οι δίσκοι πιέζονται απαλά για να διασφαλιστεί η καλή επαφή με την επιφάνεια του άγαρ χωρίς να καταστραφούν οι δίσκοι.
4. Επώαση :
- Το εμβολιασμένο τρυβλίο με αντιβιοτικούς δίσκους επωάζεται σε κατάλληλη θερμοκρασία (συνήθως 35-37°C) για καθορισμένο χρονικό διάστημα (συνήθως 16-24 ώρες) για να επιτραπεί η ανάπτυξη βακτηρίων και η διάχυση αντιμικροβιακών παραγόντων.
5. Μέτρηση Ζωνών Αναστολής :
- Μετά την επώαση, οι πλάκες εξετάζονται για την παρουσία ζωνών αναστολής γύρω από τους δίσκους αντιβιοτικών.
- Με χάρακα ή ψηφιακό παχύμετρο, η διάμετρος κάθε ζώνης αναστολής μετριέται σε χιλιοστά.
- Η διάμετρος της ζώνης υποδηλώνει την ευαισθησία του εξεταζόμενου οργανισμού στο συγκεκριμένο αντιβιοτικό.
6. Ερμηνεία Αποτελεσμάτων :
- Οι μετρούμενες διάμετροι ζώνης συγκρίνονται με τυποποιημένους πίνακες ή οδηγίες, όπως αυτές που παρέχονται από το Ινστιτούτο Κλινικών και Εργαστηριακών Προτύπων (CLSI), για να προσδιοριστεί η ευαισθησία ή η αντοχή του ελεγχόμενου οργανισμού στους αντιμικροβιακούς παράγοντες που ελέγχονται.
- Οι οργανισμοί κατηγοριοποιούνται ως ευαίσθητοι, ενδιάμεσοι ή ανθεκτικοί με βάση το μέγεθος των ζωνών αναστολής και τα καθιερωμένα ερμηνευτικά κριτήρια.
7. Ποιοτικός έλεγχος :
- Για να εξασφαλιστεί η ακρίβεια και η αξιοπιστία της τεχνικής Kirby-Bauer, σε κάθε παρτίδα δοκιμής περιλαμβάνονται στελέχη ποιοτικού ελέγχου με γνωστά πρότυπα ευαισθησίας για την παρακολούθηση της απόδοσης της μεθόδου και των αντιδραστηρίων που χρησιμοποιούνται.
Είναι σημαντικό να ακολουθείτε τυποποιημένες διαδικασίες και να ερμηνεύετε τα αποτελέσματα σύμφωνα με καθιερωμένες οδηγίες για να λαμβάνετε αξιόπιστες και κλινικά σχετικές πληροφορίες από τις δοκιμές ευαισθησίας στα αντιβιοτικά Kirby-Bauer.