Η απλήρωτη αγάπη είναι ένα επαναλαμβανόμενο θέμα στο έργο, καθώς αρκετοί χαρακτήρες είναι ερωτευμένοι με κάποιον που δεν ανταποδίδει τη στοργή τους. Για παράδειγμα, η Βιόλα είναι ερωτευμένη με τον Δούκα Ορσίνο, ο οποίος είναι ερωτευμένος με την Ολίβια. Η Olivia, με τη σειρά της, είναι ερωτευμένη με τον Cesario (που είναι στην πραγματικότητα η Viola μεταμφιεσμένη). Αυτό δημιουργεί έναν περίπλοκο ιστό ανεκπλήρωτης αγάπης που οδηγεί μεγάλο μέρος της δράσης και του χιούμορ του έργου.
Η λανθασμένη ταυτότητα είναι επίσης βασικό χαρακτηριστικό του έργου. Η Βιόλα μεταμφιέζεται σε άντρα με το όνομα Σεζάριο για να μπει στην υπηρεσία του Ορσίνο. Αυτή η μεταμφίεση οδηγεί σε μια σειρά από παρεξηγήσεις και επιπλοκές, καθώς άλλοι χαρακτήρες μπερδεύουν τη Βιόλα με άντρα και την ερωτεύονται. Η λανθασμένη ταυτότητα δημιουργεί επίσης ευκαιρίες στη Βιόλα να παρατηρεί και να σχολιάζει τους άλλους χαρακτήρες, προσθέτοντας στο χιούμορ του έργου.
Συνολικά, η απλήρωτη αγάπη και η εσφαλμένη ταυτότητα είναι δύο βασικά χαρακτηριστικά που συμβάλλουν στο χιούμορ και την πολυπλοκότητα της Δωδέκατης Νύχτας.