Οι μάγισσες παρουσιάζονται για πρώτη φορά στην Πράξη 1, Σκηνή 3, όταν συναντούν τον Μάκβεθ και τον Μπάνκο στο ρείκι. Χαιρετούν τον Μάκβεθ με τρεις προφητείες:ότι θα γίνει ο Θαν του Κάουντορ, ο Θαν του Γκλάμις και ο Βασιλιάς της Σκωτίας. Το Banquo έχει επίσης τρεις προφητείες, αλλά δεν είναι τόσο συγκεκριμένες. Οι προφητείες των μαγισσών φυτεύουν σπόρους φιλοδοξίας στο μυαλό του Μάκβεθ και αρχίζει να σχεδιάζει για να τις εκπληρώσει.
Οι μάγισσες εμφανίζονται ξανά στην Πράξη 3, Σκηνή 5, όταν ο Μάκβεθ τις επισκέπτεται στη σπηλιά τους. Του δείχνουν μια σειρά από οράματα, που αντιπροσωπεύουν το μέλλον του και τις συνέπειες των πράξεών του. Οι μάγισσες λένε επίσης στον Μάκβεθ ότι θα νικηθεί από τον «Μπίρναμ Γουντ» και «έναν άντρα που δεν γεννήθηκε από γυναίκα». Αυτές οι προφητείες οδηγούν τον Μάκβεθ να πιστεύει ότι είναι ανίκητος και γίνεται ακόμα πιο αδίστακτος στην επιδίωξη της εξουσίας.
Οι μάγισσες παίζουν καθοριστικό ρόλο στην πτώση του Μάκβεθ. Θέτουν σε κίνηση τα γεγονότα που οδηγούν στην καταστροφή του και του παρέχουν την ψευδή αίσθηση ασφάλειας που τελικά οδηγεί στην ήττα του. Οι μάγισσες είναι μια ισχυρή και επικίνδυνη δύναμη και αντιπροσωπεύουν τη σκοτεινή πλευρά της ανθρώπινης φύσης.
Εκτός από τη δημιουργία μιας αίσθησης μυστηρίου και σασπένς, οι μάγισσες χρησιμεύουν επίσης για να σχολιάσουν τα θέματα του έργου. Αντιπροσωπεύουν τις υπερφυσικές δυνάμεις που μπορούν να επηρεάσουν την ανθρώπινη συμπεριφορά και δείχνουν πόσο εύκολα οι άνθρωποι μπορούν να διαφθαρούν από τη φιλοδοξία και τη δύναμη. Οι μάγισσες είναι μια προειδοποίηση για το κοινό ότι η ανεξέλεγκτη φιλοδοξία μπορεί να οδηγήσει σε τραγικές συνέπειες.