Πρωτόκολλο για ηλεκτροφόρηση πηκτής πολυακρυλαμιδίου

ηλεκτροφόρηση γέλης χρησιμοποιείται στο εργαστήριο , προκειμένου να διαχωριστούν οι πρωτεΐνες ή τα νουκλεϊκά οξέα από το άλλο. Ηλεκτροφόρηση πολυακρυλαμιδίου χρησιμοποιώντας αντί του αγαρόζης χρησιμοποιείται συχνότερα για πρωτεΐνες για τον προσδιορισμό των μοριακών μαζών των πολυπεπτιδίων της πρωτεΐνης. Παρασκευή του πηκτώματος αγαρόζης
Η <ρ> Ένα πήκτωμα πολυακρυλαμιδίου παρασκευάζεται με σχισμές σε αυτό. Το πήκτωμα σχηματίζεται με χύσιμο ενός θερμού διαλύματος υγρού πολυακρυλαμιδίου σε ένα ρηχό κουτί . Το κουτί θα πρέπει να περιέχει μία δομή comblike με τα δόντια που δείχνουν προς τα κάτω μέσα στο διάλυμα . Η πολυακρυλαμιδίου καθίσταται μία πηκτή σύντομα αφού έχει χυθεί και η κτένα απομακρύνεται για να αποκαλύψει ορθογώνιες τρύπες.
Εικόνων δωδεκυλοθειικό νάτριο (SDS)
Η

Η πρωτεΐνη υποβάλλεται σε κατεργασία με δωδεκυλο θειικό νάτριο (SDS) ώστε να μετουσιωθεί τις υπομονάδες ενός μεγάλου πρωτεΐνης έτσι ώστε κάθε ένας μπορεί να μετρηθεί χωριστά . Τα πλεονεκτήματα σε αυτό είναι ότι ο SDS δίνει τα πολυπεπτίδια ένα αρνητικό φορτίο έτσι θα μεταναστεύουν προς το αρνητικό άκρο , ή άνοδος , του πηκτώματος . Δεύτερον , η SDS φροντίζει όλα υπομονάδες θα έχουν το ίδιο φορτίο και ως εκ τούτου θα μεταναστεύσουν όλα στη γέλη σύμφωνα με μοριακές μάζες τους , αντί των τελών . Εικόνων
προσθήκη της πρωτεΐνης

Μια μικρή ποσότητα του DNA ή πρωτεΐνης τοποθετείται σε μία από τις ορθογώνιες οπές στο ένα άκρο της πηκτής . Ένα ηλεκτρικό ρεύμα διαπερνά διαμέσου του πηκτώματος σε ουδέτερο ρΗ . Περίπου 10 μικρολίτρα μιας σκάλας DNA καθώς και δύο έλεγχοι είναι επίσης φορτώνονται στην πηκτή . Η σκάλα του DNA χρησιμοποιείται για να επιτρέψει μέτρησης του πόσο πολύ το δείγμα μεταφέρθηκε στη διαδικασία της ηλεκτροφόρησης .
Εικόνων Ηλεκτροφόρηση
Η

Το μηχάνημα τίθεται σε λειτουργία με 100 βολτ και αφήστε τρέξει για 30 λεπτά . Μετά τα δείγματα έχουν ηλεκτροφορήθηκαν επί 30 λεπτά, το πήκτωμα μαζί με ένα δίσκο απομακρύνονται και τοποθετούνται σε ένα δίσκο χρώση για περίπου τρία λεπτά. Αυτό στη συνέχεια ακολουθείται από την τοποθέτηση του πηκτώματος σε ζεστό νερό για πέντε λεπτά. Το gel είναι τώρα έτοιμο να τοποθετηθεί στο κιβώτιο φωτός , προκειμένου να παρακολουθήσετε την κίνηση των θραυσμάτων DNA .
Εικόνων Άλλες εκτιμήσεις
Η

Κατά την προβολή του τζελ κάτω από το φως , θα πρέπει να ληφθούν υπόψη ορισμένα σημαντικά πράγματα. Ένα κύτταρο μπορεί να είναι είτε ετερόζυγοι ή ομόζυγοι για το γονίδιο , ανάλογα με το αν το αντίγραφο είναι παρόν ή όχι παρόν σε δύο αντίγραφα ή σε ένα μόνο . Το ετερόζυγο αποτέλεσμα μπορεί να εμφανίζονται ως ένα ενιαίο συγκρότημα , επειδή τα τμήματα του DNA που ενισχύονται πιο αποτελεσματικά εμφανίζονται σκοτεινότερες στο πήκτωμα . Μια χρωστική ουσία προστίθεται επίσης έτσι κάθε πολυπεπτίδιο μπορεί να δει τόσο κατά τη διάρκεια και μετά την ηλεκτροφόρηση .
Εικόνων